wb等到了分离胶时可以加大电压。调电压的目的是为了加快实验进度。在浓缩胶的时候，电压一般比较低，主要是为了让所有蛋白质聚集在一起。等到了分离胶时，可以调大电压。这样蛋白质在分离胶中的移动速度会变快，从而缩减实验时间。
我最小也只做过十几KD的。但是根据原理呢主要有以下注意事项：
1。当然是胶的浓度。9kda的话要适当增大，15-20%应该差不多吧。如果实在不行还能考虑用gradient gel。
2。二是转膜缓冲液，内要含20%甲醇，新鲜配制，反复使用的话注意甲醇会蒸发掉。如果连续使用的话两三次应该还可以。甲醇一是能够洗掉跑胶时泡透了的SDS(SDS使蛋白带负电，方便移动)，二是帮助蛋白固定到膜上面。它同时有收缩胶的孔径的副作用，但对小分子无影响。
3。三是膜的孔径。很多常规的膜孔径为0.45um。你如果做小分子，17kd以下都跑掉了，那你应该试试0.2um孔径的膜。有一个小诀窍是转膜时叠两张膜一起转，如果小分子蛋白跑过了前面一张膜，那总还有可能被后面一张膜抓到。
4。四是转膜时间。小分子的话就不要过夜转，采取100V一小时应该就可以了，注意降温。
