1、具有倍压整流的机型,市电压正常的情况下错误地工作于倍压整流状态。
2、脉宽调整电路出现问题。

3、振荡定时电容容量下降。
4、主负载(行扫描电路)未工作,造成开关电源负载轻引起电压升高(仅适用于稳压调整环路间接取样的电源,即稳压取样不是直接取自B加输出)。
关于小分子蛋白的Western-blot问题,实验时的胶浓度,电压,转膜条件等等
大蛋白是一种分子量较大的蛋白质,其转膜需要一定的条件。以下是转膜的一般步骤及建议条件:
1 准备膜:准备合适的膜,一般可以选择PVDF(聚偏氟乙烯)或Nitrocellulose(硝酸纤维素)膜,根据实验需要选择不同孔径大小的膜。
2 样品处理:将待测蛋白质进行处理,如SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳),以使得蛋白质在后续转膜操作中易于传递。
3 转膜操作:将样品挤压在膜上,一般需要注意以下条件:

- 转膜时间:转膜时间视实验目的而定,一般在1-2小时之间可以获得较好的转膜效果。
- 转膜电压:一般推荐使用100 V左右的电压,这可以保证较好的蛋白转膜效果,同时避免损坏膜的情况发生。
- 转膜缓冲液:转膜过程中需要使用适当的缓冲液,提供适宜的离子强度和pH,以便维持蛋白质的稳定性。
- 膜湿度:保持转膜膜的湿度,以防止转膜过程中膜的干燥,影响转膜效果。
4 蛋白固定:转膜完成后,可以对蛋白进行固定,以便后续进行Western blot等蛋白质检测方法。
总之,转膜条件的选择需要考虑实验的具体目的、样品性质和转膜膜的质量等因素。

我最小也只做过十几KD的。但是根据原理呢主要有以下注意事项:
1。当然是胶的浓度。9kda的话要适当增大,15-20%应该差不多吧。如果实在不行还能考虑用gradient gel。
2。二是转膜缓冲液,内要含20%甲醇,新鲜配制,反复使用的话注意甲醇会蒸发掉。如果连续使用的话两三次应该还可以。甲醇一是能够洗掉跑胶时泡透了的SDS(SDS使蛋白带负电,方便移动),二是帮助蛋白固定到膜上面。它同时有收缩胶的孔径的副作用,但对小分子无影响。
3。三是膜的孔径。很多常规的膜孔径为045um。你如果做小分子,17kd以下都跑掉了,那你应该试试02um孔径的膜。有一个小诀窍是转膜时叠两张膜一起转,如果小分子蛋白跑过了前面一张膜,那总还有可能被后面一张膜抓到。
4。四是转膜时间。小分子的话就不要过夜转,采取100V一小时应该就可以了,注意降温。


