通常跑胶分为跑琼脂糖胶和 SDS-PAGE 胶,当然也还有非变性胶,这里主要说明上面两种。
琼脂糖凝胶电泳

一、原理

琼脂糖是 D-和 L-半乳糖残基通过糖苷键交替构成的线状聚合物,且琼脂糖凝胶具有三维网络结构,物质分子通过时会受到阻力,不同的大小的带电物质在电场下涌动时受到的阻力不同,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。
一般用于分离核酸分子,同时不同构象的核酸的迁移速率也不一样,超螺旋环状>切口环状>线状。不同浓度的胶适用的分离范围也不一样。
电泳出现拖尾现象,就是弥散.其原因,主要从以下两个方面考虑:
1、PCR产物自身原因:
往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多.
对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶.②减少dNTP的浓度.③适当降低Mg2+浓度.④增加模板量,减少引物的用量 ,减少循环次数,提高退火温度.
2、电泳体系的问题:
(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液.(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样.(3)电压太高.(4)适当把你的胶的浓度加大.(根据你的片断大小而定)(5)观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照.


