超标。 东莞市凤岗顺洲水产品店的生鱼,呋喃唑酮代谢物检验值为5.83μg/kg,标准值为不得检出,0.5是超标的,不符合国家食品安全规定。海洋、江河、湖泊里出产的动物或藻类等的统称,和相关的服务或加工行业的总称。
水产禁用药物有何危害?如何替代?
呋喃唑酮在1995年被禁用。

由于硝基呋喃类药物在体内很快就能被代谢,而在组织中结合的代谢产物则能存留较长的一段时间,所以在分析此类药物的残留时经常要分析其代谢后的产物,管理部门就以检测代谢产物为手段达到检测硝基呋喃类残留的目的。呋喃唑酮代谢产物AOZ;呋喃它酮代谢产物AMOZ;硝基呋喃托英代谢产物AHD;硝基糠腙(呋喃西林)代谢产物SEM。
用来检测呋喃唑酮代谢物的最常用方法是LC-UV,LC-MS和LC-MS/MS。酶联免疫方法结合了色谱技术,采用AOZ衍生物的特异性抗体,具有很高的精确度,更灵敏的反应,较低的操作技术要求和短暂的检测时间,检测样本量大等特点在检测中很好的表现出来。
该试剂盒可以测定水产样本中呋喃唑酮代谢物的残留量。 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的残留物AOZ经衍生化后和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗呋喃唑酮代谢物的衍生物抗体,加入酶标二抗后,用他TMB底物显色,样本吸光值与其所含残留物AOZ的含量成负相关,与标准曲线比较即可得出相应残留物呋喃唑酮代谢物的残留量。
试剂盒特性
试剂盒灵敏度:0.025ppb
检测下限
虾鱼等水产组织因存在一定的干扰,检测下限在0.1ppb
样本回收率
水产组织 …………………………………………… 80±15%
交叉反应率
呋喃唑酮代谢物…………………………………… 100%
呋喃它酮代谢物………………………………………< 0.01%
呋喃妥因代谢物 ……………………………………< 0.01%
硝基糠腙(呋喃西林)代谢物…………………………< 0.01% 1、96孔酶标板×1块 (包被有偶联抗原)
2、标准液×6瓶:(1ml/瓶)
0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225ppb,0.675ppb,2.025ppb
3、酶标二抗 12ml ……………………… 红色帽
4、浓缩抗体 0.8ml ……………………… 绿色帽
5、底物液 A 液 7ml ……………………… 白色帽
6、底物液 B 液 7ml ……………………… 红色帽
7、终 止 液 7ml ……………………… **帽
8、20×浓缩洗涤液 40ml ……………………… 透明帽
9、2×浓缩复溶液 50ml…………………… 透明帽 ┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm
┅┅匀质器
┅┅振荡器
┅┅离心机
┅┅微量移液器:单道 20ml~200ml、200ml~1000ml
多道 250ml
┅┅天平:感量0.01g ┅┅乙酸乙酯
┅┅正己烷(或正庚烷)
┅┅K2HPO4?3H2O
┅┅2-硝基苯甲醛
┅┅甲醇
┅┅浓HCl
┅┅NaOH 注:样本处理前须知
处理任何样本时,都必须注意:
(a)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。
(b)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可
对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。
样本前处理需配制:
配液1:衍生化试剂 15.1mg 2-硝基苯甲醛
加甲醇10ml溶解(浓度为10mM)。

配液2:用去离子水将2×浓缩复溶液按1:1稀释(1份浓缩复溶液+1份去离子水)用于抗体稀释和样本的复溶。
配液3:0.1M K2HPO4 22.8g K2HPO4?3H2O
加去离子水溶解定容至1L。
配液4:1M HCl 8.3ml 浓HCl
用去离子水定容至100ml。
配液5:1M NaOH 4g NaOH
用去离子水溶解定容至100ml。
(a)水产样本前处理
┅┅用均质器均质样本;
┅┅取1±0.05g的均质物(鱼/虾),分别加入4ml的蒸馏水, 0.5ml 1M HCL和100ml衍生化试剂,充分振荡;
┅┅在37 oC过夜孵育(大约16h);
┅┅分别加入5ml 0.1M K2HPO4,0.4ml 1M NaOH和5ml乙酸乙酯,剧烈振荡30s;
┅┅在室温下(20-25 oC/68-77℉)3000g以上离心10min;
┅┅用1ml正己烷(或正庚烷)溶解干燥物,用1ml已稀释好的复溶液充分混合;
┅┅取50ml下层液体用于分析。
样本稀释倍数:2
注:样本应当保存在阴凉避光处并且需要冷藏保存。 测定前应须知:
1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温(20-25℃)。
2、使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。
3、在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜盖住微孔板。
操作步骤:
1、将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出,置室温(20-25℃)平衡30min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、配液:将40ml浓缩洗涤液(20倍浓缩)用去离子水稀释至800ml备用(或按需量稀释),稀释好的洗涤液在4℃
环境可保存一个月,使用前也需回温。
3、取出板架及需要数量的微孔板,将不用的微孔板重新密封,保存于2-8℃不要冷冻。
4、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品均需做2孔。
5、将浓缩抗体用已稀释好的复溶液11倍稀释(1份抗体加入10份稀释液)。
6、加标准品/样本50μl/孔,然后加已稀释好的抗体50μl/孔,用盖板膜盖板,25℃环境中反应60min,取出用洗涤液每孔加250ml,洗板5次,每次10秒,拍干(拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)。
7、显色:每孔加入显色剂A液50ml,再加B液50ml,轻轻振荡混匀,25℃环境中避光显色30min。
8、测定:每孔加入终止液50ml,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测,在5min内读完数据),测定每孔OD值。 1、用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(µg/L)。假设样本1的吸光度值为0.310,样本2的吸光度值为0.820,标准液吸光度值分别是:0ppb为1.810;0.025ppb为1.520;0.075ppb为1.230;0. 225ppb为0.760; 0.675ppb为0.389;2.025ppb为0.118。则样本1的浓度范围是0.675ppb-2.025ppb,乘以其对应的稀释倍数; 样本2的浓度范围是0.075 ppb-0.225ppb,乘以其对应的稀释倍数。
2、定量分析
(1)百分吸光率的计算,标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值(双孔)除以第一个标准(0标准)的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光度值(%)= B ×100%
B0
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0µg/L标准溶液的平均吸光度值
(2)标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标,以呋喃唑酮代谢物标准品浓度(µg/L)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中AOZ实际浓度。(具体计算方法需用专用软件)
(1)孔雀石绿过去常被用于制陶业、纺织业、皮革业、食品颜色剂和细胞化学染色剂,1933年起其作为驱虫剂、杀虫剂、防腐剂在水产养殖中使用,后曾被广泛用于预防与治疗各类水产动物的水霉病、鳃霉病和小瓜虫病。从20世纪90年代开始,国内外学者陆续发现,该药倒入水中,能溶解泥土中的锌而导致水生生物中毒,并具有高毒素、高残留等副作用,因此,已禁用此药。替代物目前国内渔药生产厂家推出了一些替代品,如水霉净及一些含碘的消毒剂。

(2)氯霉素(盐、酯及制剂)氯霉素具有广谱抗菌作用,对多数G+、G-菌均有效,在水产上能有效防治烂鳃病、赤皮病。但该药对人类的毒性较大,可抑制骨髓造血功能,造成过敏反应,引起再生性障碍贫血(包括白细胞减少、红细胞减少和血小板减少等)。此外,该药还可引起肠道菌群失调及抑制抗体的形成,抑制肝药酶,影响其他药物在肝脏的代谢,使药效延长,或使毒性增强,目前已被较多国家禁用。替代物外用泼洒可用溴制剂或氯制剂替代,内服可用复方磺胺类、氟苯尼考等。
(3)呋喃唑酮(痢特灵)该药内服后难吸收,肠道内药物浓度高,血液浓度低且迅速被破坏,难以维持有效的药物浓度,不宜用于全身性感染,只宜用于肠道感染和原虫病,故水产上用于治疗鱼的肠炎。呋喃唑酮的残留物,会对人体造成潜在的危害,可引起溶血性贫血、多发性神经炎、眼部损害和急性肝坏死等,目前已被欧盟国家等明令禁用。替代物泼洒可用氯制剂、溴制剂代替,内服可用氟哌酸(诺氟沙星)、新霉素(弗氏霉素)、复方新诺明(复方磺胺甲基异唑)替代。
(4)甘汞、硝酸亚汞、醋酸汞和吡啶基醋酸汞汞对人体有较大的毒性,极易产生聚集性中毒,出现肾损害。汞制剂易富集,主要集中在肾脏,其次是肝和脑。汞主要经肾脏随尿排出,肾脏损害严重,在水产上主要用于治疗小瓜虫病。目前,已有多个国家在水产养殖上禁用这类药物,在观赏鱼养殖中防治小瓜虫病可以酌情考虑使用。替代物福尔马林(甲醛)泼洒15~25克/米3,隔天一次,连用2~3次。亚甲基蓝泼洒2克/米3,连用2~3次。
(5)喹乙醇该药主要作为一种化学促生长剂在水产动物饲料中添加,它的抗菌作用是次要的。由于此药的长期添加,已发现对水产养殖动物的肝、肾等造成很大的破坏,引起水产养殖动物肝脏肿大、腹水,致使水产动物死亡。如果长期使用该类药,还会导致水产养殖动物产生耐药性,造成肠球菌广为流行,严重危害人类健康。目前,该药剂在欧盟等已被明令禁用。替代物目前尚无效果好又可靠的替代物。部分养殖户用喹烯酮和黄霉素配伍使用有一定促生长效果。
本条内容来源于:中国农业出版社《保护自然资源》


