酯类通常比较稳定,不易溶于水（即使是简单的甲酸甲酯）,要想在水里发生水解需要加热与催化剂（酸、碱液）.盐酸羟胺和三价铁离子不容易与酯类反应,当然甲酸某酯中含有醛基,有还原性,可以被三价铁离子氧化.
酰胺类（-CONH2）是一种很弱的碱（是由于分子中氨基氮上的未共用电子对与羰基的π电子形成共轭体系,使氮上的电子云密度降低,因而接受质子的能力减弱）它可与强酸形成络合物,很不稳定,遇水即完全水解.酰胺在强酸强碱存在下长时间加热,可水解成羧酸和氨（或胺）.
羧酸是弱酸,与酰胺不怎么反应的,即使是促使酰胺的水解也较难
还原剂是为了把Fe3+还原为Fe2+，缓冲溶液是调节一定的PH值范围，使配位反应更完全，所以要在显色剂之前加。还原剂必须先加。
因为Fe2+与邻二氮菲可生成稳定的桔红色配合物[Fe(phen)3]2+，Fe3+也能与邻二氮菲生成淡蓝色[Fe(phen)3]3+，加入盐酸羟胺目的是盐酸羟胺作为还原剂把三价铁还原成二价铁离子，让其与邻二氮菲形成稳定络合物。
若在还原剂前先加显色剂邻二氮菲，邻二氮菲会与Fe3+络合，三价铁络合物不如与二价铁的络合物稳定，也就是络合不够完全，不能准确得出铁的含量。这个跟纯度无关，主要是因为二价铁极易被氧化，这样测得的吸光度不准，加入盐酸羟胺的作用是防止二价铁被氧化（也可以加入抗坏血酸，即维生素C）。
扩展资料：
分光光度法注意事项：
1、运输过程中由于温度不适等问题导致酶活力下降。
2、溶菌酶需在－20℃环境保存。可能由于保存温度问题使酶活力下降。
3、培养基制作的过程要注意控制温度不要太高，防止成分结块沉淀。
4、用户应注意控制活力测定时，底物溶液的浓度不要太高，防止细菌菌体沉淀造成吸光度降低影响实验。
百度百科-分光光度法
百度百科-盐酸羟胺
百度百科-邻二氮菲
