试剂级的无水乙醇和工业级的无水乙醇最明显的区别就是价格相差很大; 试剂级的无水乙醇比较卫生,可以用于医药方面; 工业级的无水乙醇纯度也有99。7% 成份一试剂级的几乎一样; 一般公司在试做新产品时,用量很小,试剂级的成本最低
1wash buffer中加入无水乙醇后,终浓度差不多就是70%的乙醇溶液了,在沉淀的DNA中,由于过多的盐杂质存在,影响DNA的酶切等反应,wash buffer就是洗去这些盐杂质的。



2用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用06倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。如果你没有加无水乙醇,核酸不能沉淀,都随洗液弃掉了。
3十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulfate)遇到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾(potassium dodecylsulfate, PDS),钾离子置换了SDS中的钠离子形成了不溶性的PDS,而高浓度 的盐,使得沉淀更完全。大家知道SDS专门喜欢和蛋白质结合,平均两个氨基酸上结合一个SDS分子,钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质 沉淀了,让人高兴的是大肠杆菌的基因组DNA也一起被共沉淀了。这个过程不难想象,因为基因组DNA太长了,长长的DNA自然容易被PDS给共沉淀了,尽管SDS并不与DNA分子结合。
需要特别说明的是:醋酸的加入是为了中和NaOH,因为长时间的碱性条件会打断DNA,所以要中和之。基因组DNA一旦发生断裂,只要是50-100 kb大小的片断,就没有办法再被PDS共沉淀了。所以碱处理的时间要短,而且不得激烈振荡,不然最后得到的质粒上总会有大量的基因组DNA混入。


